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 一個(gè)月內，學(xué)術(shù)期刊連發(fā)兩篇論文！上半年引爆生物圈的華人科學(xué)家張鋒教授團隊又有新動(dòng)作！這次，他在一月內，分別在《Nature》、《Science》連發(fā)兩篇論文！他將CRISPR-Cas13a改造成了靈敏度達到了阿摩爾級（aM，10的負18次方摩爾每升），可以檢測單分子的SHERLOCK技術(shù)。而這其中，RPA起到了不小的作用。

那么，什么是RPA呢？

RPA,即重組酶聚合酶擴增技術(shù)，是在由多種酶和蛋白的參與下，在恒溫條件下實(shí)現核酸指數擴增的技術(shù)，被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。

RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應溫度在37°C左右。

RPA的反應原理

RPA的反應過(guò)程，首先是重組酶與引物結合，形成蛋白-DNA復合物。接著(zhù)在dsDNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì )發(fā)生鏈交換反應形成并啟動(dòng)DNA合成，對模板上的目標區域進(jìn)行指數式擴增。而被替換的DNA鏈與SSB（單鏈DNA結合蛋白）結合，防止進(jìn)一步被替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非?？?，一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

RPA與相關(guān)技術(shù)的比較

與PCR實(shí)驗相比，RPA實(shí)驗能在恒定溫度下進(jìn)行全程實(shí)驗，沒(méi)有復雜的操作，對儀器及人員的要求不高，適合基層或現場(chǎng)快速診斷。

而另一種新興技術(shù)，LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名為“環(huán)介導等溫擴增反應”，由于其簡(jiǎn)便的操作，也被視為PCR技術(shù)強有力的競爭者。在此，讓我們對比下LAMP與RPA兩種試劑盒進(jìn)行的實(shí)驗：

上月，RPA 技術(shù)的開(kāi)發(fā)公司——英國TwistDx Inc的商務(wù)總監Tony Hill來(lái)到了我公司，為我們深入介紹了RPA技術(shù)，及TwistDx的各類(lèi)產(chǎn)品。

Tony還與我公司的技術(shù)人員一同拜訪(fǎng)上海市農業(yè)科學(xué)院及上海閱爾基因技術(shù)有限公司，分別向趙凱研究員及其研究生，以及閱爾基因的研究人員介紹了RPA 技術(shù)，解答他們在使用中遇到的問(wèn)題。

 英國TwistDx公司（前身為ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過(guò)突破等溫DNA擴增，開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴增技術(shù)（RPA），被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng )新。

TwistDx以此技術(shù)為基礎生產(chǎn)的核酸擴增類(lèi)產(chǎn)品，能在恒定且較低的溫度下，僅用10~20分鐘，進(jìn)行單分子核酸檢測。這一技術(shù)對環(huán)境、硬件設施的要求很低，對于生物防護、水體檢驗、食品檢驗、醫療診斷、微流體、獸醫等方面都有良好的應用。

RPA擴增的各種體系試劑盒中，含有DNA、RNA擴增所需的所有試劑，研究者只要準備好引物和模板就行了。擴增結果可以分別通過(guò)凝膠電泳檢測、熒光定量檢測或試紙條檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

默瑞（上海）生物科技有限公司與英國TwistDx公司達成戰略合作，負責RPA技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品在中國大陸地區的推廣。

默瑞（上海）生物科技有限公司（Morey Biosciences ,Inc .簡(jiǎn)稱(chēng)默瑞生物）成立于2016年7月22日，于8月1日正式運營(yíng)，其前身是一家具有15年代理銷(xiāo)售生命科學(xué)儀器的專(zhuān)業(yè)公司。默瑞生物以此為經(jīng)營(yíng)理念。默瑞擁有兩個(gè)產(chǎn)品部，儀器部和試劑部。

儀器部主要代理產(chǎn)品有：Leica顯微系統，Merck Millipore實(shí)驗室純水超純水儀及配套耗材，Roche實(shí)時(shí)定量PCR儀、核酸純化，Beckman流式細胞儀、離心機，IKA桌面小儀器，Lonza 細胞核轉染系統，Miele清洗機，Tecan酶標儀、液體工作站等。

試劑部主要代理產(chǎn)品有： TwistDx恒溫擴增試劑盒，Echelon酯類(lèi)研究試劑，Jackson ImmunoResearch抗體，MTI-GlobalStem細胞轉染試劑，ChromoTek標簽抗體， Horizon Discovery測序標準品和細胞，Enzymatics二代測序酶， Biomatik公司Elisa試劑盒，BiosPacific抗體抗原，bioWORLD植物生長(cháng)劑，Nanocs PEG修飾劑，Spectrumlabs透析袋，Brighter Ideas熒光蛋白，Lumiprobe熒光染料，Polysciences微球，Emfret心血管疾病研究抗體， Iduron糖胺聚糖產(chǎn)品，JenaBioscience分子試劑，eENZYME病毒研究工具等。